Лабораторная диагностика герпеса

В связи с тем, что урогенитальные заболевания, обусловленные изучаемыми инфекциями, имеют большое разнообразие клинических проявлений, как по характеру, интенсивности (степени тяжести) патологического процесса, так и по локализации, исключительно важное значение приобретает лабораторная диагностика.

Только лабораторные методы исследования могут помочь в установлении этиологии урогенитального заболевания человека.

Для лабораторной диагностики герпетической инфекции могут быть использованы везикулярная жидкость, соскобы с пораженной кожи, соскобы с эпителия роговицы, конъюнктиваль-ная секреция, спинномозговая жидкость, биопсийные кусочки внутренних органов при летальных случаях. Лабораторный диагноз основывается на изучении соскобов эпителия везикул и эрозий, окрашенных по Романовскому-Гимзе или гематоксилином и эозином с целью выявления гигантских клеток с внутриядерными включениями, типичными для этой инфекции. Этот метод диагностики широко используется для выявления внутриядерных включений в соскобах эпителия везикул и эрозий.

Сбор, обработка первичного материала, полученного от больных для выделения и культивирования вируса герпеса. Мазки, соскобы с генитальных поражений (везикул, язвочек) берут ложечкой Фолькмана, стерильным ватным тампоном или тупым скальпелем и помещают в пенициллиновые флаконы, содержащие по 1 мл раствора Хэнкса, или в среду Игла, или в фосфатный буфер с 500 ЕД пенициллина и 500 мг стрептомицина. Эти образцы (инокуляты) предназначаются для вирусологического изучения. Их можно использовать сразу или поместить в холодильник при -20°С для хранения.

Другую часть соскобов наносят на предметные стекла, фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимзе, гематоксилином и эозином и другими способами, применяемыми для цитологического изучения.

Везикулярную жидкость лучше брать из свежего пузырька. Обычно это делают стеклянным капилляром (пастеровской пипеткой) или стерильным шприцом. Эта жидкость предназначается для заражения животных или культур ткани. Если животные не подготовлены и культуры тоже, то везикулярную жидкость необходимо заморозить.

Для выделения вируса герпеса используют различные животные и тканевые культуры, например, первичные культуры клеток почек кролика, диплоидные клетки человека (клетки W1-38), клетки Hela, выращиваемые по общепринятой методике. Для поддержания роста культур тканей употребляют среду 199 или среду Игла (MEM). Эти культуры заражают инокуля-торами по 0,2 мл в каждую пробирку. После часовой адаптации при комнатной температуре в пробирки с культурой добавляют поддерживающую среду и инкубируют их в термостат при 37°С. Наблюдения за ними проводят ежедневно до появления цитопатогенного действия (ЦПД), т.е. обнаружения клеточной дегенерации, округления клеток и отпадания их от поверхности стекла. ВПГ начали культивировать in vitro с 1920 г. До 1960 г. не было известно, что существует два антигенных типа, 1-й тип экстрагенитальный и 2-й - генитальный.

Выделение ВПГ в культуре клеток (клеточных культурах) является золотым стандартом лабораторной диагностики.

С целью изоляции вируса герпеса крупного рогатого скота Б.И. Сурин и соавторы (1968) использовали с успехом пер-вичнотрипсинизированную и перевиваемую культуру клеток почки теленка (ППТ). Культивирование проводили с использованием 0,5%-ного гидролизата лактальбульмина на растворе Хенкса с добавлением 5-10%-ной инактивированной сыворотки крупного рогатого скота.

В качестве инфекционного материала использовали эмульсию лимфоцитов, приготовленную из пахового лимфатического узла, которой заражали культуру ППТ и помещали в термостат при 37°С. Наблюдения проводили ежедневно до появления ЦПД. При появлении ЦПД, из этих культур и питательных сред готовят образцы вируса, которые замораживают при 70°С для хранения или последующего серийного культивирования и титрования.

Для выделения вируса герпеса можно использовать также 12-дневные куриные эмбрионы, заражая их на хорионаллан-тоисную оболочку по 0,3 мл. Кроме того, многие авторы для изоляции вируса герпеса используют новорожденных мышей и кроликов для интрацеребрального заражения и инокуляции в роговую оболочку глаза, получая на этих животных характерные лабораторные модели экспериментальной герпетической инфекции и изучая патогенность возбудителя для этих животных.

Koзлoвa В.И., Пyxнep А.Ф.

Дополнительная информация:

Материалы, размещенные на данной странице, носят информационный характер и не являются публичной офертой. Посетители сайта не должны использовать их в качестве медицинских рекомендаций. ООО «ТН-Клиника» не несёт ответственности за возможные негативные последствия, возникшие в результате использования информации, размещенной на данной странице.