 |
|
Иммунофлюоресцентный метод определения вируса герпесаЗа последние годы стал широко использоваться иммунофлюоресцентный метод (МФА) при герпетических поражениях гениталий. Для выявления антигена по МФА чаще применяют прямой метод. Препараты для исследования приготавливают по общеустановленной методике. Их просматривают с иммерсией в люминесцентном микроскопе (МЛ-2). В соскобах клеток с участков, пораженных герпесом, при помощи МФА установлено яркое гранулярное свечение в ядрах, количество и размеры которых варьируют. Специфическая флюоресценция чаще и ярче проявляется в округлых и гигантских клетках, в которых отмечается яркое свечение включений в ядрах и цитоплазме пораженных клеток. Во всех клетках, пораженных вирусом герпеса, установлено содержание герпетического антигена в ядрах клеток в начальной стадии и появление антигена в цитоплазме в поздней стадии герпетической инфекции. Специфичность флюоресценции подтверждается соответствующими контролями. В контрольных препаратах свечения не наблюдается; изредка в цитоплазме клеток отмечают неспецифические светящиеся образования в виде точек или, наоборот, глыб неправильной формы с острыми краями, которые по форме, цвету и интенсивности свечения отличаются от специфических включений. Установлена корреляция между цитологическим методом обнаружения внутриядерных включений и МФА. Иммунофлюоресцентный метод оказался чувствительным, не менее эффективным, чем другие методы, и вполне пригодным для лабораторной диагностики герпетических поражений гениталий. Дифтеритический вульвовагинит может быть принят за герпетический. В этом случае материал, взятый и посеянный на агар, выявляет культуру Леффлера, нейтрализующие антитела в высоком титре свидетельствуют о той или иной инфекции. Однако следует дифференцировать герпетические поражения с импетиго, оспенным дерматитом и др. Изолированный вирус должен иметь следующие характеристики, которые идентифицировали бы его как вирус герпеса: вызывать проявления герпетических поражений; спровоцировать кератоконъюнктивит на скарифицированной роговице у кролика с характерными внутриядерными включениями в эпителиальных клетках; продуцировать типичные бляшки на хорионаллантоисной мембране куриных яиц; нейтрализоваться иммунной герпетической кроличьей сывороткой. При выраженных формах генитального герпеса мы наблюдали положительный результат МФА в 100% случаев как и в первую неделю обследования, так и спустя месяц после начала заболевания, т.е. независимо от сроков проведения обследования больных, от локализации и степени тяжести поражения. По данным ВОЗ, с помощью метода изоляции вируса в культуре ткани удается обнаружить ВПГ у лиц с подозрением на герпетическую генитальную инфекцию в 82%, а непрямого иммунопероксидазного окрашивания - в 55% случаев, прямой иммунофлюоресценции - в 53% и цитологического метода - в 38% случаев. В реакции прямой гемагглютинации (РПГА) вирус герпеса фиксируется на сенсибилизированных танином эритроцитах. С помощью применения ВПГ-антигена можно определить кожную чувствительность у инфицированных лиц. Существует корреляция между реакцией гиперчувствительности замедленного типа, иммунологической реактивностью организма и положительной динамикой лечения. По данным И.И. Маврова (1989), при первичной инфекции, вызванной ВПГ-1, нейтрализующие антитела класса IgM типоспецифичны, тогда как при первичном инфицировании ВПГ-2 образуются IgM, которые нейтрализуют оба типа ВПГ. При повторном заболевании, обусловленного ВПГ-1, пациенты длительное время имеют антитела класса IgC к ВПГ-1 и ВПГ-2. У больных с первичным инфицированием ВПГ-2 выявляется прирост антител наибольший (более высокий) к ВПГ-1. Первичное заражение ВПГ-2 приводит к образованию более высоких титров антител к ВПГ-2 и более низких к ВПГ-1. В последние годы разработаны тесты для определения антигенов (АГ) ВПГ или ДНК ВПГ с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также техники гибридизации ДНК. Но эти диагностические тесты дороги и многим лабораториям недоступны. Помимо этого существует типоспецифические серологические тесты, с помощью которых можно выявить распространенность инаппарантной генитальной инфекции. Точный типоспецифический анализ возможен при использовании ферментного иммунодота (ФИД), основанного на обнаружении типоспеци-фического белка, гликопротеина G и Вестерн иммуноблота (ВИБ), который позволяет обнаружить антитела ко всему спектру вирусных белков. Эти тесты обладают наиболее высокой чувствительностью и специфичностью. Антитела к ВПГ-2 выявляются у 99% больных при использовании ВИБ и у 94% больных при использовании ФИД. Реакция нейтрализации и РСК - мало чувствительны и не дают точных результатов при типировании антител к ВПГ-1 и ВПГ-2. Блок-специфические иммунные тесты, в частности, иммуно-дот способны идентифицировать и типировать ВПГ-1 и ВПГ-2 и выявляют сероконверсию при первичных инфекциях. С помощью ВИБ можно идентифицировать и типировать ВПГ-1 и ВПГ-2, дифференцировать материнские антитела от антител новорожденного. Эти типоспецифические тесты очень дороги и малодоступны многим лабораториям. Недавно был разработан тест для определения антител к ВПГ-1 в слюне с помощью авидинбиотинового комплекса в ИФА (Zhi-Quing, 1993). Перспективным и надежным методом для серодиагностики является реакция радиоиммунопреципитации с использованием типоспецифических моноклональных антител (МАТ-РИП) как при первичной, так и при рецидивирующей генитальной инфекции. IgM-AT к антигенам ВПГ обнаруживаются в сыворотках инфицированных больных уже через 4-8 дней после начала инфекции, затем появляются IgG-AT. Koзлoвa В.И., Пyxнep А.Ф. Герпетическая инфекция, подробнее...
Дополнительная информация: |
